细胞表面染色基本操作过程 直标法： 全血标本（EDTA抗凝） 在Facoll管中加入一定体积的直标抗体，加入50/100ul全血， 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书） 加入1ml/2ml溶血素，振荡混匀，避光室温孵育10分钟 1000rpm离心5分钟 弃上清，混匀，加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测 细胞标本（包括红细胞，PBMC，培养细胞及血小板） 在Facoll管中加入一定体积的直标抗体，加入1×106的细胞 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书） 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测 间标法 全血标本（EDTA抗凝） 在Facoll管中加入一定体积的纯化抗体，加入50/100ul全血， 混匀，室温孵育15-30分钟（参照说明书） 加入1 ml/2ml溶血素，振荡混匀，避光室温孵育10分钟 1000rpm离心5分钟 弃上清，混匀，加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入一定体积荧光标记二抗，混匀，室温避光孵育15-30分钟 加入1-2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测 细胞标本（包括红细胞，PBMC，培养细胞及血小板） 在Facoll管中加入一定体积的纯化抗体，加入1×106的细胞 混匀，室温孵育15-30分钟（参照说明书） 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 弃上清，加入一定体积荧光标记二抗，混匀，室温避光孵育15-30分钟 加入1-2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测 细胞内抗原染色基本操作过程 直标法 全血标本（EDTA抗凝） 在Facoll管中加入一定体积的细胞表面直标抗体，加入50/100ul全血， 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书） 加入1ml/2ml溶血素，振荡混匀，避光室温孵育10分钟 1000rpm离心5分钟 弃上清，混匀，加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml固定液，混匀，室温避光孵育20-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入0.5-1ml破膜剂，混匀，室温避光孵育20-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入直标细胞内抗体抗体，室温避光孵育15-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测 细胞标本（包括红细胞，PBMC，培养细胞及血小板） 在Facoll管中加入一定体积的细胞表面直标抗体，加入1×106的细胞 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书） 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml固定液，混匀，室温避光孵育20-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入0.5-1ml破膜剂，混匀，室温避光孵育20-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入直标细胞内抗体抗体，室温避光孵育15-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测 间标法 全血标本（EDTA抗凝） 在Facoll管中加入一定体积的细胞表面直标抗体，加入50/100ul全血， 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书） 加入1ml/2ml溶血素，振荡混匀，避光室温孵育10分钟 1000rpm离心5分钟 弃上清，混匀，加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml固定液，混匀，室温避光孵育20-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入0.5-1ml破膜剂，混匀，室温避光孵育20-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入一定体积的纯化抗体，混匀，室温孵育15-30分钟（参照说明书） 1000rpm离心5分钟 弃上清，混匀，加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入一定体积荧光标记二抗，混匀，室温避光孵育15-30分钟 加入1-2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测 细胞标本（包括红细胞，PBMC，培养细胞及血小板） 在Facoll管中加入一定体积的细胞表面直标抗体，加入1×106的细胞 混匀，室温避光孵育15-30分钟（参照说明书） 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml固定液，混匀，室温避光孵育20-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入0.5-1ml破膜剂，混匀，室温避光孵育20-30分钟 加入1ml PBS，1000rpm离心5分钟，弃上清 加入一定体积的纯化抗体，混匀，室温孵育15-30分钟（参照说明书） 1000rpm离心5分钟 加入2ml PBS，1000rpm离心5分钟 弃上清，加入一定体积荧光标记二抗，混匀，室温避光孵育15-30分钟 加入1-2ml PBS，1000rpm离心5分钟 加入0.5-1ml PBS重悬，即可上机检测
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